|
鸭病毒性肝炎(duck viral hepatitis，简称DVH)是雏鸭的一种急性接触传染性疾病，以肝炎为主要特征，世界动物卫生组织[World Organization for Animal Health(英)，Office Intentional des Epizootic(法)，OIE]把该病列为B类疫病，我国农业部列为二类疫病。DVH的病原为鸭肝炎病毒(DHV)，根据病毒的特性不同，DHV分为3种类型(DHVI、DHVⅡ、DHVⅢ)。最常见的为DHVI属肠道病毒(我国仅有此型)；DHVⅡ为星状病毒；DHVⅢ为小核糖核酸病毒。
本标准规定的雏鸭接种/保护试验和鸭(鸡)胚接种/中和试验与OIE推荐的相应方法一致。
本标准由农业部畜牧兽医局提出。
本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归口。
本标准起草单位:华南农业大学、江苏省农业科学院。
本标准主要起草人:贺东生、黄引贤、张则斌、罗函禄、刘福安。
1 范围
本标准规定了鸭病毒性肝炎的雏鸭接种/保护试验和鸭(鸡)胚接种/中和试验的技术要求。
本标准适用于鸭病毒性肝炎的诊断及检疫。
2 雏鸭接种/保护试验
2.1 材料准备
2.1.1 研钵或平皿，玻璃匀浆器，10mL带胶塞玻璃瓶。
2.1.2 1mL和5mL注射器及针头。
2.1.3 0.22μm微孔滤膜及滤头。
2.1.4 离心管、手术剪刀和手术镊子。
2.1.5 0.85%生理盐水:在使用前加入青霉素和链霉素，使其最终浓度分别为2000IU/mL和2000μg/mL。
2.1.6 DHV高免血清(在国内诊断检疫仅用DHVI，对进境鸭的检疫还应加上DHVⅡ、DHVⅢ抗血清)。
2.1.7雏鸭:1～5日龄75只易感健康雏鸭。
2.2操作方法
2.2.1病料处理
在无菌室内超净台上无菌采取数例病鸭的肝脏组织10g，于研钵或平皿中剪碎，用玻璃匀浆器制备组织匀浆，按1:10(W/V)加入生理盐水。将匀浆液转至离心管中，3000 r/min离心10min。弃去上层脂肪，抽取中间清亮的液体，再经过0.22μm的灭菌微孔滤膜过滤，收集滤过的液体，作为病料样品直接接种；或装入10mL玻璃瓶中，盖上胶塞，置专用的密闭铁盒里，于-20℃保存待检，保存期不超过1年。
2.2.2试验
选取75只健康雏鸭，分为A、B和C三组，每组25只，做如下处理:
A组(攻毒保护组):每只鸭颈背部皮下注射1mL DHV高免血清。24h后，每只鸭皮下注射0.2mL的待检样品。
B组(攻毒组):每只鸭颈背部皮下注射0.2mL的待检样品。
C组(对照组):每只鸭颈背部皮下注射0.2mL的生理盐水。
将上述三组鸭置于相同的管理条件下，隔离饲养，连续观察。
2.3结果判定
当C组没有任何一只雏鸭死亡时，对照试验才成立，可进行如下判定，否则应重检。
阳性(+):B组特征性死亡的鸭只总数达30%以上(含30%)，而A组死亡的鸭只总数低于10%(含10%)。
可疑(±):B组特征性死亡的鸭只总数低于30%，而A组的鸭只不死亡。此可疑结果应重检，仍为可疑时则判为阳性。
3鸭(鸡)胚接种/中和试验
3.1材料准备
3.1.1 1 mL注射器及针头4套。
3.1.2生理盐水:在使用前加入青霉素和链霉素，使其最终浓度分别为2000IU/mL和2000μg/mL。
3.1.3 DHV高免血清。
3.1.4 鸭(鸡)胚:75枚12～14日龄的易感健康鸭胚；也可选用9～10日龄的无特定病原(SPF)鸡胚。
3.2操作方法
3.2.1取0.5mL病料样品，加入4.5mL的生理盐水，制备成100倍稀释的待检病毒液。
3.2.2选取75只鸭或鸡胚，分为A、B和C共三组，每组25只胚，处理如下:
A组(中和试验组):取2mL高免血清和2mL的待检病毒液，混合均匀。置于37℃温箱中作用30min后，每胚经尿囊腔接种0.2mL。
B组(接种试验组):取2mL的生理盐水，加入2mL待检病毒液，混匀，每只胚经尿囊腔接种0.2mL。
C组，对照组:每只胚经尿囊腔接种0.2mL的生理盐水。
将上述三组接种的鸭(鸡)胚用石蜡或无菌胶布封口后，置于37℃孵化箱内继续孵化，每天照蛋2次，剔除接种后24h内A、B、C三组因细菌污染而死亡的胚，分组记录其死亡情况及胚胎剖检病变。观察至第7d(如用鸡胚，则为10d)。
3.3结果判定
当C组中没有任何胚胎死亡，才可进行如下判定，否则应重检。
阳性(+):B组特征性死亡的鸭(鸡)胚总数达20%以上(含20%)，而A组的胚不死亡。
可疑(±):B组特征性死亡的鸭(鸡)胚总数低于20%，而A组的胚不死亡。此可疑结果应重检，仍为可疑时则判为阳性。
阴性(－):B组和A组的胚均不死亡。 |