|
1 范围
本标准规定了动物结核病的检测方法和要求。
本标准适用于动物结核病检测。
2 定义、符号和缩略语
本标准采用下列符号和缩略语：
PPD：提纯蛋白衍生物(purifiedproteinderivative)。
IU：国际单位(intemationalunit)。
3 细菌学检查
3.1 病料的采集和处理
用于细菌学检查的材料采自淋巴结及其他组织。当活畜有可疑的呼吸道结核、乳房结核、泌尿生殖道结核、肠结核时，其痰、乳、精液、子宫分泌物、尿和粪便可作为细菌学检查的材料。
对那些结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验阳性，但尸检时无病理学病变的动物，可从下颌、咽后、支气管、肺(特别是肺门及肺门淋巴结)、纵膈及一些肠系膜的淋巴结采集样品送检。
样品应封装在无菌的容器内冷藏运送。
为了提高检出结果，样品可采取消化浓缩法处理，处理方法见附录A(标准的附录)。
3.1.1 痰
对牛常可用痰进行细菌学检验。牛咯痰极少，它在清晨采集。用硬橡胶管自口腔伸入至气管内。外端连接注射器吸取痰液。亦可取牛咳出的痰块进行检验。
痰样品稀薄时，可加入等量的4％～6％硫酸(见附录A中A1)处理，如痰样品粘稠时，则加入5倍量的4％硫酸处理。充分摇匀后置37℃作用20min，以3000r/min～4000r/min离心，沉淀物作染色镜检、培养和动物试验。
也可用2倍量15％～20％安替福民(antiformin)溶液(见附录A中A3)处理痰液，将混合物置37℃作用lh—2h后离心。以灭苗生理盐水冲洗沉淀物几次后，取沉淀物染色镜检、培养和动物试验。
3.1.2 乳
怀疑有乳房结核时，可无菌采集乳汁进行检验(一般以挤出之最后乳汁含菌量较多，早晨挤出的乳中含菌量最高)。
将乳汁分置4～6支离心管中，每管l0mL，以3000r/min～4000r/min离心20min～30min，吸取上层乳脂和管底的沉淀物作染色镜检、培养和动物试验。
乳汁lOmL加酒精和乙醚各l0mL及15％～20％安替福民溶液30mL，摇匀置37℃恒温箱内lh～2h，取出加等量灭菌蒸馏水混匀，离心沉淀后弃去上清，取沉淀物作染色镜检、培养和动物试验。
3.1.3 精液和子宫分泌物
有生殖道结核可疑时，可采集公畜精液、母畜子宫分泌物进行细菌学检查。
处理子宫分泌物，可用15％～20％安替福民溶液，混匀后静置2h～3h，3000r/min～4000r/min离心20min，弃上清，加l0mL蒸馏水于沉淀物中。即可作动物试验，经1.5～2个月剖检。
3.1.4 尿
有肾结核可疑时，可采集尿液，一般采集中段尿液，以早晨第一次尿为宜。
如仅作染色镜检，可将尿液以3000r／min~4000r／min离心20rain后，取沉淀物涂片。
如作培养或动物试验，则应将尿液进行消化浓缩处理，再进行检验以免杂菌生长而影响检验结果。
3.1.5 粪便
有肠结核可疑时，可采集粪便进行细菌学检查，患肺结核的牛只，有时在粪便中亦可检出结核分枝杆菌。因牛常将痰液吞咽至消化道内，随粪便排出。尽量采集混有粘液或脓血的粪便。
取粪便30g，加15％～20％安替福民溶液15mL和蒸馏水55mL，混合，经2h～3h后，3000r/min～4000r/min离心30min，倾去上清液，加10mL蒸馏水于沉淀物中，将此液用纱布过滤后接种于豚鼠皮下，经1.5～2个月后剖检。
或将粪便加2倍量灭菌蒸馏水磨碎，然后加氯化钠至饱和。当液体中残渣沉淀后(液体完全澄清)，浮起的薄膜含有大量的结核分枝杆菌。取出薄膜，用等量的4％氢氧化钠(见附录A中A2)充分混合，置37℃中3h，然后离心，取沉淀物用8％盐酸中和后，即可作染色镜检、培养和动物试验。
粪便中如有粘液或脓血，可挑取粘液脓血选用任何一种消化液处理后检验。
如系纯粪便，取5g～l0g，加生理盐水约3～4倍混合后，用细铜纱网过滤，取滤液置室温中自然沉淀，然后取上层悬液置于另一大离心管或烧杯内，加消化液约3～4倍量，置37℃温箱lh～2h，同上法处理后检验。
3.1.6 组织器官
尽量采集有结节病灶的部位。猪易患颈部淋巴结结核，亦易患肠系膜淋巴结核，且常呈钙化或干酪样病变。家禽常在肠、脾、肝发生结核病灶，有时亦可见于肺或卵巢。
病变组织需先研磨，制成乳剂，通常取组织乳剂或其他液状病料2mL～4mL，加入等量的5％氢氧化钠溶液，充分振摇5min～10min，或摇至发生液化为止，液化后经3000r/min～4000r/min离心15min～30min，沉淀物加1滴酚红作指示剂，以2mol/L盐酸中和至淡红色后，作染色镜检、培养和动物试验。
如病料为脓状或干酪状或钙化的结节病灶组织，可直接作染色镜检，往往可以检出众多的结核分枝杆菌。但得到阴性结果时，应浓缩处理后检验。
3.2 检验方法
3.2.1 染色镜检
3.2.1.1 涂片
先在玻片上涂布一层薄甘油蛋白(鸡蛋白20mL，甘油20mL，水杨酸钠0.4g，混匀)然后吸取标本滴加其上，涂布均匀。
如检验标本为乳汁等含脂肪较多的材料，在涂片制成后，可先用二甲苯或乙醚滴加覆盖于涂片之上，经摇动lmin～2min脱脂后倾去，再滴加95％酒精以除去二甲苯，待酒精挥发后即可染色。
3.2.1.2 染色
染色液配制方法见附录B(标准的附录)。
萎—尼氏抗酸染色：处理过的被检材料涂片后，经火焰固定，加苯酚复红染色液(见附录B中B1)覆盖，将玻片在火焰上加热至出现蒸汽(不能产生气泡)，如此热染5min(如染色液干涸，须加适量补充)。水洗后滴加3％盐酸酒精(见附录B中B2)脱色30s～60s(至无色素脱下为止)。水洗后，以骆氏美蓝染色液(见附录B中B3)复染lmin。水洗，吸干，镜检。抗酸菌应不被盐酸酒精脱色而染成红色，其他细菌与动物细胞可被盐酸酒精脱色而均被染成蓝色。
3.2.1.3 镜检
结核分枝杆菌在显微镜下呈细长平直或微弯曲的杆菌，长1.5um～5um，宽0.2um～0.5um，在陈旧培养基上或干酪性淋巴结内的菌体，偶尔可见长达l0um或更长。
3.2.2 培养
3.2.2.1 培养基配制方法见附录C(标准的附录)。
3.2.2.2 被检标本经消化浓缩后吸取其沉淀物作为培养材料。初次讣离，可用配氏培养基(见附录C中C1)、L—J培养基(见附录C中C2)或青霉素血液琼脂培养基(见附录C中C3)。
3.2.2.3 将经过处理的标本接种到培养基上(同时作2～4份)，培养一天后、以熔化的石蜡封口，继续培养。
3.2.2.4 牛型结核分枝杆菌比人型结核分枝杆菌生长要缓慢得多。初次培养牛型结核分枝杆菌时，需36℃一37℃培养5—8周方可出现菌落。在固定培养基上不产生任何颜色，菌落湿润、略显粗糙并发脆。加1％的丙酮酸钠能促进生长，但在噻吩—2酸肼(T2H)培养基(见附录C中C4)上不生长。
3.2.2.5 禽型结核分枝杆菌生长需要2～3周。形成湿润、弥漫状，光滑及星光状菌落。最适生长温度为40℃—42℃。在T2H培养基上生长。
3.2.2.6 人型结核分枝杆菌生长需要36℃～37℃培养3～4周。该菌落干燥、粗糙，呈白色、黄色或橙色。牢牢附着于培养基。在T2H培养基上生长。
3.2.2.7 非典型分杖杆菌生长快速，大部分(但不是全部)产生白色或具有橙色或黄色色素，常形成黄色或橙色菌落。某些种类的色素只有在亮处才显出。大多数非典型种类的生长速度比牛或人型结核分枝杆菌快。
3.2.3 动物试验
本试验是确诊结核病的主要依据，如能与涂片镜检和培养同时进行，则结果更为可靠。
3.2.3.1 试验动物在试验前，应进行牛型结核分枝杆菌PPD和禽型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验。
3.2.3.2 豚鼠对牛型和人型结核分枝杆菌敏感，对禽型结核分枝杆菌有抵抗力，常只能形成局部病灶。
3.2.3.3 家兔对禽型结核分枝杆菌高度敏感。对牛型结核分枝杆菌敏感。人型结核分枝杆菌虽可使其肺部形成少量病灶，但可趋于痊愈而不致死。
3.2.3.4 处理过的病料约lmL—3mL，皮下或肌肉或腹腔内注射，每份病料至少接种2只同种动物。接种后30d左右，进行禽型结核分枝杆菌PPD和牛型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验，如有阳性反应，可剖检其中的半数动物进行病理学观察、细菌培养和涂片镜检。另一半继续观察至3个月内剖检观察。如果为阴性反应，可于40d左右剖检其中的半数，观察病理学变化、细菌培养和涂片镜检，另一半继续观察至3个月再剖检观察。
3.2.4 牛型、禽型和人型地结核分枝杆菌鉴定方法见附录D(提示的附录)。
4 结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验
4.1 牛型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验
用结核分枝杆菌PPD进行的皮内变态反应试验对检查活畜结核病是很有用的。该试验用牛型结核分枝杆菌PPD进行。
4.1.1 牛的牛型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验
出生后20d的牛即可用本试验进行检疫。
4.1.1.1 操作方法
a)注射部位及术前处理：将牛只编号后在颈侧中部上三分之一处剪毛(或提前一天剃毛)，三个月以内的犊牛，也可在肩肿部进行，直径约10cm。用卡尺测量术部中央皮皱厚度，作好记录。注意，术部应无明显的病变。
b)注射剂量：不论大小牛只，一律皮内注射0.1mL(含2000IU)。即将牛型结核分枝杆菌PPD稀释成每毫升含2万IU后，皮内注射0.1mL。冻干PPD稀释后当天用完。
c)注射方法：先以75％酒精消毒术部，然后皮内注射定量的牛型结核分枝杆菌PPD，注射后局部应出现小疱，如对注射有疑问时，应另选15cm以外的部位或对侧重作。
d)注射次数和观察反应：皮内注射后经72h判定，仔细观察局部有无热痛、肿胀等炎性反应，并以卡尺测量皮皱厚度，作好详细记录。对疑似反应牛应立即在另一侧以同一批PPD同一剂量进行第二回皮内注射，再经72h观察反应结果。
对阴性牛和疑似反应牛，于注射后96h和120h再分别观察一次，以防个别牛出现较晚的迟发型变态反应。
4.1.1.2 结果判定
a)阳性反应：局部有明显的炎性反应，皮厚差大于或等于40mm。
b)疑似反应：局部炎性反应不明显，皮厚差大于或等于2.0mm、小于4.0mm。
c)阴性反应：无炎性反应。皮厚差在2.0mm以下。
凡判定为疑似反应的牛只，于第一次检疫60d后进行复检，其结果仍为疑似反应时，经60d再复检。如仍为疑似反应，应判为阳性。
4.1.2 其他动物牛型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验
参照牛的牛型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验进行。
4.2 禽型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验
禽型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验是最广泛使用于家禽的试验。牛及其他哺乳动物也可用牛型结核分枝杆菌PPD和禽型结核分枝杆菌PPD同时在不同的部位进行，以区分特异性和非特异性变态反应。
4.2.1 禽的禽型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验
4.2.1.1 操作方法
用10mm×0.5mm针头肉垂皮内注射0.1mL(0.25万IU)禽型结核分枝杆菌PPD，48h后观察结果。
4.2.1.2 结果判定
阳性反应为接种部位肿胀，从5．0mm直径的小硬结到扩展至其他肉垂与颈部的广泛性水肿。火鸡肉垂的结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验，没有家禽的试验那样可靠。其他禽类也可用翼蹼作试验，但结果一般不理想。水禽可接种脚蹼，但试验不敏感并经常与接种部位的感染相混淆。
4.2.2 牛的禽型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验
4.2.2.1 操作方法
与牛型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验相同，只是禽型结核分枝杆菌PPD的剂量为每头0.1mL，含0.25万IU。即将禽型结核分枝杆菌PPD稀释成每毫升含2.5万IU后，皮内注射0.1mL。
4.2.2.2 结果判定
a)对牛型结核分枝杆菌PPD的反应为阳性(局部有明显的炎性反应，皮厚差大于或等于4.0mm)，并且对牛型结核分枝杆菌PPD的反应大于对禽型结核分枝杆菌PPD的反应，二者皮差在2.0mm以上，判为牛型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验阳性。
对已经定性为牛型结核分枝杆菌感染的牛群。其中即使少数牛的皮差在2.0mm以下，甚至对牛型结核分枝杆菌PPD的反应略小于对禽型结核分枝杆菌PPD的反应(反应差小于或等于2.0mm)，只要对牛型结核分枝杆菌PPD的反应在2.0mm以上，也应判定为牛型分枝杆菌PPD皮内变态反应试验阳性牛。
b)对禽型结核枝杆菌PPD的反应大于对牛型结核分枝杆菌PPD的反应，两者的皮差在2.0mm以上，判为禽型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验阳性。
对已经定性为副结核分枝杆菌或禽型结核分枝杆菌感染的牛群。其中即使少数牛的皮差在2.0mm以下，甚至对禽型结核分枝杆菌PPD的反应略小于对牛型结核分枝杆菌PPD的反应(不超过2.0mm)，只要对禽型结核分枝杆菌PPD的反应在0.2mm以上，也应判为禽型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验阳性牛。
附 录 A
（规范性附录）
标本消化浓缩法
痰液或乳汁等样品，由于含菌量较少，如直接涂片境检往往是阴性结果。此外，在培养或作动物试验时，常因污染杂菌生长较快，使病原结核分枝杆菌被抑制。下列几种消化浓缩方法可使检验标本中蛋白质溶解、杀入污染杂菌，而结核分枝杆菌因有蜡质外膜而不死亡，并得到浓缩。
A.1 硫酸消化法
用4％～6％硫酸溶液将痰、尿、粪或病灶组织等按1：5之比例加入混合，然后置37℃作用lh～2h，经3000r/min～4000r/min离心30min，弃上清，取沉淀物涂片镜检、培养和接种动物。也可用硫酸消化浓缩后，在沉淀物中加入3％氢氧化钠中和，然后抹片镜检、培养和接种动物。
A.2 氢氧化钠消化法
取氢氧化钠35g～40g，钾明矾2g，溴麝香草酚蓝20mg(预先用60％酒精配制成0.4％浓度，应用时按比例加入)，蒸馏水1000mL混合，即为氢氧化钠消化液。
将被检的痰、尿、粪便成病灶组织按1：5的比例加入氢氧化钠消化液中，混匀后，37℃作用2h～3h，然后无菌滴加5％—10％盐酸溶液进行中和，使标本的pH调到6.8左右(此时显淡黄绿色)，以3000r/min～4000r/min离心15min～20min，弃上清，取沉淀物涂片镜检、培养和接种动物。
在病料中加入等量的4％氢氧化钠溶液，充分摇荡5min～10min，然后用3000r/min离心15min～20min，弃上清，加1滴酚红指示剂于沉淀物中，用2mol/L盐酸中和至淡红色，然后取沉淀物涂片镜检、培养和接种动物。
在痰液或小脓块中加人等量的1％氢氧化钠溶液，充分振摇15min，然后用3000r/min离心30min，取沉淀物涂片镜检、培养和接种动物。
对痰液的消化浓缩也可采用以下较温和的处理方法：取lmol/L(或4％)氢氧化钠水溶液50mL，0.1mol/L柠檬酸钠50mL，N—乙酰—L—半胱氨酸0.5g，混合。取痰一份，加上述溶液2份，作用24h～48h，以3000r/min离心15min，取沉淀物涂片镜检、培养和接种动物。
A.3 安替福民(antiformin)沉淀浓缩法
溶液A：碳酸钠12g、漂白粉8g、蒸馏水80mL。
溶液B：氢氧化钠15g、蒸馏水85mL。
应用时A、B两液等量混合，再用蒸馏水稀释成15％～20％后使用，该溶液须存放于棕色瓶内。
将被检样品置于试管中，加入3～4倍量的15％～20％安替福民溶液，充分摇匀后36℃作用1h，加1～2倍量的灭菌蒸馏水，摇匀，3000r/min～4000r/min离心20min～30min，弃上清沉淀物加蒸馏水恢复原最后再离心一次，取沉淀物涂片镜检、培养和接种动物。
附 录 B
（规范性附录）
萋-尼氏抗酸染色液配制方法
B.1 苯酚复红染色液
碱性复红饱和酒精溶液(每100mL95％酒精加3g碱性复红)10mL，5%苯酚溶液90mL，二者混合之后用滤纸滤过。
B.2 3%盐酸酒精脱色液
浓盐酸3mL，95％酒精97mL，混匀。
B.3 骆氏美蓝染色液
甲液：美蓝0.3g,95％酒精30mL。
乙液：0.01％氢氧化钾溶液100mL。
将甲乙两液相混合
附 录 C
（规范性附录）
配氏(Petragnane)培养基
C.1 配氏(Petragnane)培养基
C.1.1 成分
5％苯酚溶液
新鲜脱脂牛奶450mL，马铃薯淀粉18g，天门冬素(或蛋白胨)2.6g，去皮马铃薯225g，鸡蛋15个(除去3个蛋清)，甘油40g，2％孔雀绿水溶液30mL。
C.1.2 制法
将马铃薯去皮擦成丝，加入马铃薯淀粉、天门冬素(或蛋白胨)、脱脂牛奶置烧杯中水浴煮沸40min— 60min，并不时搅拌均匀，使成糊状。待冷却至50℃时加入打碎的鸡蛋(蛋壳先用75％酒精消毒洗净)，混匀后用四层纱布过滤除渣。最后加入甘油和孔雀绿水溶液搅拌均匀，分装于灭菌的试管中。
将分装培养基的试管置血清凝固器(或流通蒸汽锅)内，间歇灭菌3次，每天一次，第一天65℃灭菌30min，第二、三天75℃一80℃灭菌30min。
C.1.3 用途
分离培养结核分枝杆菌用。
C.2 L—J(Lowenstein—Jensen)培养基
C.2.1 成分
无水磷酸二氢钾(KH2P04)2.4g，硫酸镁(MgSO4·H2O)0.24g，枸橼酸镁0.6g，DL—天门冬素(DL—Asparagin)3.6g，甘油12g，蒸馏水600mL，马铃薯粉30g，鸡蛋(约30个)1000Ml，2％孔雀绿水溶液20mL。
C.2.2 制法
将磷酸二氢钾、硫酸镁、枸橼酸镁、甘油和蒸馏水混合，加热使溶解。取马铃薯粉加人上述溶液内，随加随搅拌，水浴煮沸1h。鸡蛋用75％酒精消毒外壳后，打开，将蛋清和蛋黄充分搅匀，4层纱布过滤、待上述加马铃薯粉的盐溶液冷却至50℃时，加入鸡蛋液和孔雀绿，并充分搅匀、分装，80℃灭菌30min后，37℃培养48h，若无杂菌污染即可使用。
C.2.3 用途
供培养结核分枝杆菌用。
C.3 青霉素血液琼脂培养基
C.3.1 成分
琼脂1.5g，中性甘油lml，蒸馏水74mL，兔全血(或牛全血)25mL，青霉素(2000IU/m1)1.85mL。
C.3.2 制法
将琼脂、中性甘油及蒸馏水混合，经103.4kPal5min灭菌。待冷却到50℃时加入兔全血(或牛全血)与青霉素，混合后分装，经37℃培养48h，无杂菌污染即可使用。
C.3.3 用途
供培养结核分枝杆菌用。
C.4 噻吩—2酸肼(T2H)培养基
C.4.1 成分
L—J培养基，T2H。
C.4.2 制法
取L—J培养基(见C2)100mL，水浴煮沸，加T2Hlmg，充分搅匀。分装，80℃灭菌30min后，37℃培养48h，若无杂菌污染即可使用。
C.4.3 用途
供结核分枝杆菌生化鉴定用
附 录 D
（提示的附录）
牛型、禽型和人型结核分枝杆菌鉴定
牛型、禽型和人型结核分枝杆菌的鉴定，主要依据生化试验和动物试验。
D.1 生化试验
牛型、禽型和人型结核分枝杆菌的生化试验特性见表D1。
表D1
|
生化试验类型 |
烟酸试验 |
Tween —80
水解试验 |
耐热接触酶试验 |
硝酸盐还原试验 |
尿素酶试验 |
T2H抗性试验 |
|
牛型结核分枝杆菌 |
— |
— |
— |
— |
+ |
— |
|
禽型结核分枝杆菌 |
— |
— |
+ |
— |
— |
+ |
|
人型结核分枝杆菌 |
+ |
± |
— |
+ |
+ |
+ |
D.1.1 烟酸试验
D.1.1.1 试验方法
以热蒸馏水浸泡固体培养基上的培养物15min一30min，洗下。每个培养物分装入2支试管中，每管0.4mL，再加入3％联苯胺乙醇溶液0.2mL。然后向其中一管加人10％溴化氰溶液(此液剧毒，应在通风橱内操作)0.2mL。
D1．1．2结果判定
凡含10％溴化氰溶液的试管出现桃红色沉淀，另一管只产生五色沉淀者判为阳性；两支试管都为产生无色沉淀者判为阴性。
D.1.2 吐温—80(Tween—80)水解试验
D.1.2.1 试验方法
向100mL磷酸缓冲液(1/15mol／L，pH7.0)中加入0.5mLTween ―80、2mL0.2％中性红溶液。经112kPa灭菌20min，分装于试管中，每管2mL。在4℃～10℃可保存2周。
取上述试管，加入10mg/mL的菌液0.5mL，37℃培养，3d～5d观察结果。
D.1.2.2 结果判定
试管内由原来的琥珀色变为桃红色或红色者判为阳性。无颜色变化为阴性。
D.1.3 耐热接触酶试验
D.1.3.1 试验方法
用生理盐水配制出5mg/mL～10mg/mL的菌液，分装试管，每管0.5mL，以68℃水浴20min，冷却后加入0.5mL过氧化氢(H2O2)和Tween～80混合液(10％Tween ―80加等量30％H2O2)。观察结果。
D.1.3.2 结果判断
肉眼观察，如有多量小气泡自管底升起，即为阳性。否则为阴性。
D.1.4 硝酸盐还原试验
D.1.4.1 试验方法
在100mLpH7.0的磷酸盐缓冲液中，加人硝酸钠(NaNO3·H2O)85mg，经112kPa灭菌20min后分装，每管2mL。
向上述溶液中加入10mg/mL的菌液，经37℃水浴2h后，加入1滴2倍稀释的盐酸，2滴0.2％氨苯磺胺，2滴0.1％N—甲基盐酸二氨基乙烯。在4℃～10℃存放2周后判断结果。
D.1.4.2 结果判定
呈粉红色至紫红色者为阳性。无色或淡粉色为阴性。
D.1.5 尿素酶试验
D.1.5.1 试验方法
将被检材料接种尿素培养基。37℃培养。
D.1.5.2 结果判定
在尿素培养基上长出结核分枝杆菌菌苔(或菌落)，并且使培养基变成红色，即为阳性。培养基不变色为阴性。
D.1.6 T2H抗性试验
D.1.6.1 试验方法
将被检材料接种T2H培养基和L—J培养基。37℃培养。
D.1.6.2 结果判定
在上述两种培养基上长出结核分枝杆菌菌苔(或菌落)即为阳性。U―J培养基上生长，而在T2H培养基上不生长，则为阴性。
D.2 动物试验
牛型、禽型和人型结核分枝杆菌的动物试验特性见表D2。
表D2
|
试验动物 |
豚鼠 |
兔 |
鸡 |
|
牛型结核分枝杆菌 |
易感 |
易感 |
不易感 |
|
禽型结核分枝杆菌 |
不易感 |
易感 |
易感 |
|
人型结核分析杆菌 |
易感 |
不易感 |
不易感 |
D.2.1 试验方法
试验动物在试验前，应进行结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验。豚鼠用牛型结核分枝杆菌PPD检测；鸡用禽型结核分枝杆菌PPD检测；兔用牛型和禽型结核分枝杆菌PPD检测。
将处理过的病料约lmL--3mL，选用皮下、肌肉或腹腔内途径注射试验动物，每份病料至少接种2只同种试验动物。
接种后30d左右，对豚鼠用牛型结核分枝杆菌PPD检测；对鸡用禽型结核分枝杆菌PPD检测；对兔用牛型结核和禽型结核分枝杆菌PPD检测。如有阳性反应，可剖检其中的半数动物进行病理学观察、细菌培养和涂片镜检。另一半继续观察至3个月再剖检观察。如果为阴性反应，可于40d左右剖检其中的半数，观察病理学变化、细菌培养和涂片镜检，另一半继续观察至3个月再剖检观察。
D.2.2 结果判定
D.2.2.1 牛型结核分枝杆菌感染
鸡用禽型结核分枝杆菌PPD检测阴性，无任何病变，细菌培养和涂片镜检都未见到结核分枝杆菌。同时从豚鼠和兔检测到结核分枝杆菌。或豚鼠和兔的牛型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验阳性并观察到典型病理变化。
D.2.2.2 禽型结核分枝杆菌感染
豚鼠用牛型结核分枝杆菌PPD检测阴性，无任何病变，细菌培养和涂片镜检部未见到结核分枝杆菌。同时，从兔和鸡检测到结核分枝杆菌。或兔或鸡的禽型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验阳性并观察到典型病理变化。
D.2.2.3 人型结核分枝杆菌感染
仅从豚鼠检测到结核分枝杆菌。或仅豚鼠的牛结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验阳性并观察到典型病理变化。 |